白介素5受體（可溶性）ELISA KIT

白介素5受體（可溶性）ELISA KIT是用于定量檢測(cè)生物樣本中可溶性白介素 5 受體含量的工具，在科研領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，有助于深入了解免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等生理病理過程。以下從多方面為你介紹：

1. 檢測(cè)原理：運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)。試劑盒的酶聯(lián)板預(yù)先包被了針對(duì)可溶性白介素 5 受體的特異性抗體。當(dāng)加入樣本后，樣本中的可溶性白介素 5 受體與固相抗體特異性結(jié)合。接著加入酶標(biāo)記的抗可溶性白介素 5 受體抗體，其與已結(jié)合在固相抗體上的受體形成 “固相抗體 - 可溶性白介素 5 受體 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。經(jīng)過充分洗滌，去除未結(jié)合的物質(zhì)，然后加入底物溶液（如 3,3',5,5'- 四甲基聯(lián)苯胺，即 TMB）。在酶標(biāo)抗體中酶的催化下，底物發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色的深淺與樣本中可溶性白介素 5 受體的含量成正比。通過酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)（通常為 450nm）下測(cè)量吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對(duì)比，即可計(jì)算出樣本中該受體的濃度 。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：有 96 孔或 48 孔的規(guī)格，已預(yù)包被抗可溶性白介素 5 受體抗體，是反應(yīng)的載體。

• 標(biāo)準(zhǔn)品：通常為凍干品，一般配備 2 瓶。臨用前需用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行復(fù)溶，并稀釋成不同濃度梯度，例如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測(cè)樣本，確保樣本濃度處于試劑盒的有效檢測(cè)范圍內(nèi) 。

• 酶標(biāo)抗體：即 HRP（辣根過氧化物酶）標(biāo)記的抗可溶性白介素 5 受體抗體，為濃縮液，使用時(shí)需按要求用酶標(biāo)抗體稀釋液進(jìn)行稀釋 。

• 酶標(biāo)抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標(biāo)抗體 。

• 底物溶液：如 TMB 底物，可與酶標(biāo)抗體中的 HRP 發(fā)生反應(yīng)，從而產(chǎn)生顏色變化 。

• 洗滌液：一般為濃縮液，使用時(shí)需按一定比例用蒸餾水或去離子水稀釋，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結(jié)合的物質(zhì)，降低背景干擾 。

• 終止液：多為強(qiáng)酸溶液（如硫酸），用于終止底物的顯色反應(yīng)，使反應(yīng)液顏色穩(wěn)定，便于讀數(shù) 。

• 封板膜：在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。

• 使用說明書：詳細(xì)介紹試劑盒的使用方法、注意事項(xiàng)、性能指標(biāo)等 。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后，室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過夜，隨后以 1000×g 離心 20 分鐘，取上清備用。采血應(yīng)使用無熱原、無內(nèi)毒素的一次性器材 。

• 血漿：可用乙二胺四乙酸（EDTA）、肝素等作為抗凝劑。樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，在 2 - 8℃下以 1000×g 離心 15 分鐘，取上清 。

• 細(xì)胞培養(yǎng)上清：將細(xì)胞培養(yǎng)上清以 1000×g 離心 20 分鐘，去除細(xì)胞碎片和雜質(zhì)后，取上清用于檢測(cè) 。

• 組織勻漿：用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01M，pH = 7.4）沖洗組織，去除殘留血液。剪碎組織后，按照約 1:9（w/v）的比例加入 PBS，在冰上充分研磨。再經(jīng) 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測(cè) 。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測(cè)，可保存于 4℃；若需長(zhǎng)時(shí)間保存，需置于 - 20℃或 - 80℃凍存，且要避免反復(fù)凍融，溶血樣本一般不適合檢測(cè) 。

4. 操作流程

• 準(zhǔn)備工作：從冰箱取出試劑盒，提前 30 分鐘使其平衡至室溫。同時(shí)，將濃縮洗滌液按要求比例用蒸餾水或去離子水稀釋備用 。

• 加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔?？瞻卓准尤霕颖緓i釋液，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入處理好的樣本，每孔加樣量通常為 100μL，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘 。

• 洗滌：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復(fù)洗滌 5 次，確保che底洗凈未結(jié)合物質(zhì) 。

• 加酶標(biāo)抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的酶標(biāo)抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘 。

• 再次洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 。

• 顯色：每孔加入 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（需根據(jù)實(shí)際顯色情況判斷） 。

• 終止反應(yīng)：每孔加入 50μL 終止液，此時(shí)溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色 。

• 讀數(shù)：在加終止液后 15 分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)量各孔的吸光度（OD 值） 。

• 計(jì)算結(jié)果：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本的 OD 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對(duì)應(yīng)的濃度，若樣本進(jìn)行了稀釋，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，從而得到實(shí)際濃度 。